Wirusowe DNA ospy wietrznej w ospę wietrzną w ludzkich zębodołach trójdzielnych i klatki piersiowej

WSZYSTKIE ludzkie herpeswirusy ustalają ukrytą infekcję. Ludzkie herpeswirusy – w szczególności wirus Epsteina-Barr, wirus opryszczki zwykłej i wirus ospy wietrznej-półpaśca – służyły jako modele do badania opóźnień. Wirus ospy wietrznej i półpaśca powoduje ospę wietrzną (ospę wietrzną) u dzieci, ulega utajeniu w zwojach korzeni grzbietowych i jest reaktywowany kilkadziesiąt lat później, powodując półpasiec (dorsz) u dorosłych. W czasie opóźnienia wirusowe DNA utrzymuje się w zakażonych komórkach i nie można wykryć wirionów, chociaż wirus można często odzyskać przez eksplantację tkanek latentnie zakażonych. Mechanizmy opóźnienia i reaktywacji nie są znane. To, że prawdopodobnie różnią się one od różnych wirusów opryszczki, sugeruje ustanowienie ukrytego wirusa cytomegalii i wirusa Epsteina-Barr w miejscach zewnątrznauronowych, w przeciwieństwie do lokalizacji wirusa opryszczki typu i 2 oraz wirusa ospy wietrznej-półpaśca w zwojach grzbietowo-korzeniowych. Co więcej, eksplantacja latentnie zainfekowanych tkanek prowadzi do reaktywacji wirusa opryszczki pospolitej typu z nerwu trójdzielnego i innych zwojów nerwu czaszkowo-czczego oraz wirusa opryszczki zwykłej typu 2 ze zwojów sutkowych.4 Próby odzyskania wirusa ospy wietrznej-półpaśca z ludzkich zwojów piersiowych mają nie powiodło się jednak Wcześniej donieśliśmy o wykrywaniu ukrytego wirusowego DNA w ludzkich zwojach trójdzielnych za pomocą hybrydyzacji typu Southerna6. Rozszerzenie metod hybrydyzacji kwasów nukleinowych zaczęło dostarczać informacji na temat ekspresji wirusowego DNA ospy wietrznej-półpaśca w zwojach.6 7 8 9 W szczególności, reakcja łańcuchowa polimerazy dostarczyła środków do zbadania wirusa na poziomie molekularnym ze specyficznością i precyzją, które wcześniej nie były możliwe. Ponadto, reakcja łańcuchowa polimerazy pozwala zwiększyć wielkość próby badania, ponieważ umożliwia równoczesną i wydajną analizę wielu próbek. Ponadto do reakcji łańcuchowej polimerazy potrzebna jest tylko niewielka frakcja pojedynczego zwoju, a pozostała część jest dostępna do innych analiz. Na koniec, wymagany jest tylko krótki czas ekspozycji po hybrydyzacji. Wykorzystaliśmy reakcję łańcuchową polimerazy, aby potwierdzić obecność ukrytego wirusa ospy wietrznej-półpaśca w zwojach ludzkich i dostarczyć nowych informacji na temat rozmieszczenia wirusa na wielu poziomach ludzkiej nerwicy.
Metody
Próbki tkankowe
Tabela 1. Tabela 1. Wyniki analizy reakcji łańcuchowej polimerazy DNA z ludzkich naczyń krwionośnych * Zwoje nerwu trójdzielnego i piersiowego oraz krew uzyskano od 23 dorosłych osobników 2 do 24 godzin po śmierci. Próbkę tkanki mózgowej uzyskano z mostu 31-letniego mężczyzny, który zmarł z powodu rany postrzałowej (który nie był w grupie badanej 23 podmiotów). Próbkę tkanki wątroby otrzymano od jednodniowego niemowlęcia. Choroby kliniczne obserwowane u 23 osób przedstawiono w Tabeli 1. W żadnym z wywiadów nie stwierdzono w przeszłości ospy wietrznej lub półpaśca lub zmiany skórne były zgodne z niedawnym zakażeniem wirusem ospy wietrznej-półpaśca. Zwoje usunięto aseptycznie, przemyto dwukrotnie w zmodyfikowanym podłożu Eagle a firmy Dulbecco (Grand Island Biological Co., Grand Island, NY) i przechowywano w -70 ° C. Zostały one zbadane indywidualnie lub połączone. Jako kontrolę stosowano zwoje genetyczne u noworodka zmarłego dwie godziny po urodzeniu oraz krew zdrowej 38-letniej kobiety seropozytywnej przeciw wirusowi ospy wietrznej-półpaśca w izolacji DNA.
Izolacja DNA
Gangi rozmrożono i homogenizowano Dounce w 2 ml 0,010 M kwasu TRIS-chlorowodorowego (pH 7,5), 0,1 M chlorku sodu i 0,050 M buforu EDTA (bufor TNE) na 0,5 cm3 tkanki w 4 ° C i strawiono sodem siarczan dodecylu (stężenie końcowe, 0,5 procent) i proteinaza K (200 ug na mililitr) przez jedną godzinę w 37 ° C lub przez noc w temperaturze pokojowej
[przypisy: odma płucna powikłania, odczyn wassermanna, uwiąd starczy objawy ]